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徠卡課堂:常溫超薄切片光電關(guān)聯(lián)技術(shù)的應(yīng)用

更新時(shí)間:2021-03-22      點(diǎn)擊次數(shù):1506

神經(jīng)科學(xué)是一個(gè)涉及神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能研究的多學(xué)科領(lǐng)域,目的是了解認(rèn)知和行為過程的發(fā)展,以及了解和找到疾病治療方法,如阿爾茨海默氏癥或帕金森氏癥。顯微技術(shù)的應(yīng)用對(duì)于細(xì)胞和亞細(xì)胞水平的神經(jīng)系統(tǒng)可視化以及觀察特定背景下的任何分子變化至關(guān)重要。近年來,深部組織成像方面的進(jìn)展讓人們對(duì)神經(jīng)元功能有了更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí),一些新興技術(shù)如遺傳細(xì)胞標(biāo)記和光遺傳學(xué)也協(xié)同推動(dòng)了這些發(fā)展。
 
神經(jīng)生物學(xué)研究的成像挑戰(zhàn)

神經(jīng)系統(tǒng)的研究往往需要高分辨率、深度成像和大斷面可視化相結(jié)合。還需要靈活地對(duì)不同類型的樣本進(jìn)行圖像處理,如活細(xì)胞、組織、有機(jī)化合物和模型生物體。
快速動(dòng)態(tài)過程的研究,如細(xì)胞運(yùn)輸或突觸重塑,需要高速顯微鏡。高速顯微鏡的主要挑戰(zhàn)之一是獲取高分辨率圖像,同時(shí)避免熒光飽和。
神經(jīng)科學(xué)研究通常涉及到大視野和立體成像。減少熒光散射和背景信號(hào)的需求使得獲取高對(duì)比度和分辨率的圖像變得困難,這在檢查大腦切片等致密組織中的神經(jīng)元結(jié)構(gòu)時(shí)尤為關(guān)鍵。

 


圖1 神經(jīng)上皮細(xì)胞普通款場(chǎng)顯微鏡與THUNDER Imager成像對(duì)比
Z-stack:59層(厚21μm),樣本由德國(guó)Magdeburg FAN GmbH提供

神經(jīng)生物學(xué)研究的顯微鏡方法

對(duì)于神經(jīng)生物學(xué)而言,照亮黑暗的大腦,需要一束光,brainbow技術(shù)應(yīng)允誕生,相繼的各種標(biāo)記方式已使得我們可以看到五顏六色的大腦結(jié)構(gòu)?;诠鈱W(xué)的研究方法已成為神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的主要研究手段,其中實(shí)現(xiàn)了高分辨三維成像的光學(xué)成像技術(shù)、可以進(jìn)行大范圍神經(jīng)記錄的功能性成像技術(shù),以及可運(yùn)用光來控制神經(jīng)功能的光遺傳學(xué)技術(shù),這些技術(shù)具有高空間分辨率、組織低損傷性和遺傳特異性等優(yōu)勢(shì),助力神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的研究取得了一系列突破。

對(duì)于深部活體成像,往往使用多光子顯微鏡,憑借近紅外激發(fā)的能力減少了光散射,使深部成像具有小的損傷性。光片顯微鏡對(duì)于光敏或3D樣品也是比較好的選擇,減少光毒性的同時(shí)又可以提供固有的光學(xué)切片和3D成像。

光遺傳學(xué)是一種利用光控制神經(jīng)活動(dòng)的技術(shù),能夠研究特定的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)和細(xì)胞信號(hào),需要在神經(jīng)元細(xì)胞膜上表達(dá)光敏蛋白。利用光遺傳學(xué)結(jié)合毫秒級(jí)精度計(jì)時(shí)方法在納米尺度上深入研究潛力巨大,可以研究細(xì)胞動(dòng)態(tài)過程中的特定時(shí)間點(diǎn)。

電生理學(xué)研究的是組織和細(xì)胞的電性,包括研究神經(jīng)元的電性。神經(jīng)和肌肉細(xì)胞的功能依賴于流經(jīng)離子通道的離子電流。研究離子通道的一種方法是使用貼片夾緊法,該方法可以對(duì)離子通道進(jìn)行詳細(xì)的研究,并記錄不同類型細(xì)胞的電活動(dòng),典型的就是像神經(jīng)元這樣的可興奮細(xì)胞。


圖2 斑馬魚胚胎復(fù)眼
圖像通過TCS SP8 DLS采集。法國(guó)Illkirch-Graffenstaden IGBMC成像中心Basile Gurchenkov博士供圖

神經(jīng)生物學(xué)研究Leica方案

THUNDER Imagers


圖3大鼠原代細(xì)胞培養(yǎng)

Cy5(洋紅色):β-Ⅲ型微管蛋白;Rhod(紅色):NG2蛋白,GFP(綠色):巢蛋白;DAPI(藍(lán)色):細(xì)胞核
THUNDER Imagers能夠幫您獲得對(duì)細(xì)節(jié)的清晰圖像,即使是在完整樣品內(nèi)部,也能實(shí)時(shí)觀察清晰圖像。THUNDER Imagers獲取銳利圖像的能力從根本上改變了研究人員從事生物體、組織切片和器官等3D細(xì)胞培養(yǎng)物成像時(shí)的工作方式,并且可以使用比“標(biāo)準(zhǔn)”寬場(chǎng)顯微鏡更厚的切片和更大的組織。
 
STELLARIS讓您看到更多細(xì)節(jié),收集更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù),驗(yàn)證您的假設(shè)。新一代大功率HyD檢測(cè)器的協(xié)同作用,*優(yōu)化的光路設(shè)計(jì),以及*的白激光,使得成像性能超塵拔俗。STELLARIS提供更明亮的信號(hào),使您獲得的圖像更清晰,并且擁有更強(qiáng)烈的對(duì)比度和更精致的細(xì)節(jié),即使是多個(gè)低豐度信號(hào)。

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圖5 通過同時(shí)捕捉兩個(gè)通道或在LAS X軟件中進(jìn)行光譜發(fā)射掃描并應(yīng)用通道拆分,輕松分離活鼠皮層中表達(dá)的GFP(綠色)和YFP(紅色)。

STELLARIS DIVE (Deep In Vivo Explorer) 是一款檢測(cè)光譜可調(diào)諧的多光子顯微鏡,為深部活體成像提供了穿透深度和對(duì)比度。借助STELLARIS DIVE,您可以對(duì)深的視野和細(xì)微的細(xì)節(jié)進(jìn)行調(diào)節(jié),同時(shí)可以對(duì)多色標(biāo)記進(jìn)行拆分。STELLARIS DIVE憑借其高精度和靈敏度使其成為活神經(jīng)元成像的理想選擇。

Leica憑借其*的技術(shù)優(yōu)勢(shì),從微觀納米尺度解析精細(xì)結(jié)構(gòu),到宏觀活體樣本的行為學(xué)研究,跨尺度的開啟神經(jīng)生物學(xué)研究的新窗口。Leica在神經(jīng)領(lǐng)域的探索決不止步于此,憑借其革故鼎新的膽氣,與眾多科學(xué)家一起持續(xù)推進(jìn)神經(jīng)科學(xué)在宏觀和微觀層面蓬勃向上!

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